應(yīng)用背景
乳酸菌是一類(lèi)能發(fā)酵利用糖類(lèi)物質(zhì)而產(chǎn)生大量乳酸的細(xì)菌,一類(lèi)無(wú)芽孢、革蘭氏染色陽(yáng)性細(xì)菌,它是一類(lèi)對(duì)人體有益的菌群。乳酸菌發(fā)酵能產(chǎn)生大量的有機(jī)酸、醇類(lèi)及各種氨基酸等代謝物,具有抑制腐敗菌、提高消化率、防癌等生理功效。乳酸菌是一類(lèi)重要的工業(yè)菌株,具有降膽固醇、降血壓、抗腫瘤和提高機(jī)體免疫等作用,被廣泛應(yīng)用于食品發(fā)酵,有著重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。
乳酸菌的應(yīng)用歷史非常悠久,但真正科學(xué)的研究和利用是始于19世紀(jì)中葉。近年來(lái),利用乳酸菌系統(tǒng)表達(dá)外源蛋白也已引起廣泛關(guān)注,但由于乳酸菌屬于革蘭氏陽(yáng)性菌,具有厚而致密的剛性細(xì)胞壁,致使乳酸菌內(nèi)源蛋白、表達(dá)的非分泌性外源蛋白以及其他非分泌性代謝產(chǎn)物的提取效率極低。因此,研究乳酸菌破壁方法以提高乳酸菌蛋白以及各種代謝產(chǎn)物的獲得率具有重要的意義和應(yīng)用價(jià)值。我們需要根據(jù)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和化學(xué)組成選擇合適的破壁方法,采用微生物發(fā)酵提取技術(shù),高壓細(xì)胞破壁儀可以通過(guò)空化效應(yīng)引起的沖擊波和剪切力使細(xì)胞破碎,提取乳酸菌內(nèi)源蛋白、表達(dá)的外源蛋白以及多種代謝產(chǎn)物。
1、種子液制備:將菌株接種于培養(yǎng)基中發(fā)酵培養(yǎng)
2、發(fā)酵:將種子液接種于發(fā)酵罐中,厭氧發(fā)酵
3、均質(zhì)破壁:將發(fā)酵好的乳酸菌發(fā)酵液通過(guò)高壓均質(zhì)機(jī),均質(zhì)破壁,得到破壁液
4、離心:將均質(zhì)好的破壁液,通過(guò)離心機(jī),得到離心后的破壁上清液
5、過(guò)濾:將離心后的破壁上清液過(guò)濾
高壓細(xì)胞破碎儀是生物工程中一種重要的實(shí)驗(yàn)、生產(chǎn)設(shè)備,能夠快速、高效地將細(xì)胞破碎并釋放其胞內(nèi)物質(zhì)。高壓細(xì)胞破碎儀具有破碎組織、細(xì)菌、病毒、孢子及其它細(xì)胞結(jié)構(gòu),均質(zhì)、乳化、混合、消泡、分散、提取、加速反應(yīng)等功能,故廣泛應(yīng)用于生物工程、基因工程、細(xì)胞工程、酶工程、蛋白質(zhì)工程、微生物工程、生物化學(xué)、表面化學(xué)、藥物化學(xué)、生物醫(yī)藥、生物制品等等實(shí)驗(yàn)室研究或企業(yè)生產(chǎn)。高壓細(xì)胞破碎儀是胞內(nèi)物質(zhì)(蛋白質(zhì)、酶、核酸、DNA/RNA)的提取和均質(zhì)主要的樣品制備手段,可用于蛋白質(zhì)研究、核酸萃取、破碎不同prokaryotic(原核)、eurkaryotic細(xì)胞等,是生物工程及生物制藥等行業(yè)研發(fā)及生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)設(shè)備。