應(yīng)用背景
酵母表達(dá)系統(tǒng)分為釀酒酵母表達(dá)系統(tǒng)和甲醇營養(yǎng)性酵母表達(dá)系統(tǒng),后者(如畢赤酵母)是目前應(yīng)用廣泛的酵母表達(dá)系統(tǒng)。酵母表達(dá)系統(tǒng)是工業(yè)微生物中應(yīng)用較廣泛的系統(tǒng)。酵母表達(dá)系統(tǒng)兼有原核和高等真核系統(tǒng)的優(yōu)點,既有原核表達(dá)的周期短、成本低、易操作,適合工業(yè)級別放大培養(yǎng)等優(yōu)點;同時具備了真核細(xì)胞對蛋白的糖基化修飾,空間折疊等能力,使得蛋白折疊保真性和可溶性都大幅度提高,是重組蛋白表達(dá)的強(qiáng)有力工具。
畢赤酵母體系是真核體系中操作簡單、成本低廉的系統(tǒng),在蛋白加工、折疊、翻譯后修飾等方面具有諸多優(yōu)勢,在畢赤酵母體系中蛋白轉(zhuǎn)錄后糖基化所增加的寡糖鏈長度(平均每個支鏈8-14 個甘露糖殘基)非常接近高等真核生物的結(jié)構(gòu),活性幾率大大高于原核體系。與其他表達(dá)系統(tǒng)的基因存在于游離質(zhì)粒上不同,它的表達(dá)質(zhì)粒是通過同源重組整合在基因組上的,轉(zhuǎn)化簡單(不需要病毒原液),表達(dá)菌株可以長時間保持(大于10年)而不失活。與其他表達(dá)系統(tǒng)相比,具有使用簡單、表達(dá)量高、可大規(guī)模生產(chǎn)、相對低廉的價格、有很多真核的翻譯后修飾和加工、大蛋白能較好地折疊等特點。適合于穩(wěn)定表達(dá)有功能的外源蛋白質(zhì),而且可大規(guī)模發(fā)酵,是理想的重組真核蛋白生產(chǎn)制備工具。
高壓均質(zhì)使酵母細(xì)胞破壁,酵母中更多的自溶物就更容易的釋放到水環(huán)境中,進(jìn)一步的抽提量也就增加。高壓均質(zhì)處理后酵母細(xì)胞壁破損使胞內(nèi)物不再受細(xì)胞壁的限制,酶和底物的反應(yīng)空間更加充足,反應(yīng)產(chǎn)物的抑制作用減小,既增大了酶的活性,又保持酶的活力,還加快反應(yīng)速度。酵母菌一般需要1300bar的壓力破碎3-4遍,破碎率可以達(dá)到 90%以上,常見的典型應(yīng)用:HPV疫苗、諾如病毒疫苗、乙肝疫苗、手足口病疫苗等。
高壓細(xì)胞破碎儀是生物工程中一種重要的實驗、生產(chǎn)設(shè)備,能夠快速、高效地將細(xì)胞破碎并釋放其胞內(nèi)物質(zhì)。高壓細(xì)胞破碎儀具有破碎組織、細(xì)菌、病毒、孢子及其它細(xì)胞結(jié)構(gòu),均質(zhì)、乳化、混合、消泡、分散、提取、加速反應(yīng)等功能,故廣泛應(yīng)用于生物工程、基因工程、細(xì)胞工程、酶工程、蛋白質(zhì)工程、微生物工程、生物化學(xué)、表面化學(xué)、藥物化學(xué)、生物醫(yī)藥、生物制品等等實驗室研究或企業(yè)生產(chǎn)。高壓細(xì)胞破碎儀是胞內(nèi)物質(zhì)(蛋白質(zhì)、酶、核酸、DNA/RNA)的提取和均質(zhì)主要的樣品制備手段,可用于蛋白質(zhì)研究、核酸萃取、破碎不同prokaryotic(原核)、eurkaryotic細(xì)胞等,是生物工程及生物制藥等行業(yè)研發(fā)及生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)設(shè)備。