應(yīng)用背景
枯草芽孢桿菌,是芽孢桿菌屬的一種。單個(gè)細(xì)胞0.7~0.8×2~3微米,著色均勻。B.subtilis屬革蘭氏陽(yáng)性菌,無(wú)莢膜,周生鞭毛,能運(yùn)動(dòng),需氧型,細(xì)胞壁僅含肽聚糖和磷壁質(zhì)。芽孢0.6~0.9×1.0~1.5微米,橢圓到柱狀,位于菌體中央或稍偏,芽孢形成后菌體不膨大。菌落表面粗糙不透明,污白色或微黃色,表面色暗,有皺褶狀。廣泛分布于土壤、空氣和腐敗有機(jī)物上,易在枯草浸汁中繁殖,應(yīng)用領(lǐng)域廣。
枯草芽孢桿菌廣泛應(yīng)用于淀粉酶、蛋白酶等多種工業(yè)蛋白質(zhì)的表達(dá)和維生素、核苷等重要化學(xué)品的生產(chǎn)中,是重要的工業(yè)蛋白生產(chǎn)宿主生產(chǎn)各種工業(yè)用酶,特別是α-淀粉酶、蛋白酶、木聚糖酶、脂肪酶和β-葡聚糖酶等蛋白。它表達(dá)的外源蛋白有耐熱性酶制劑 如耐高溫a-淀粉酶等淀粉加工酶系;多肽類(lèi)藥物 如白細(xì)胞介素、人表皮生長(zhǎng)因子(hEGF)、胰島素原等;殺蟲(chóng)蛋白 如Bt蛋白、蛋白酶抑制劑、植物凝集素等。
通過(guò)菌種轉(zhuǎn)基因的方式表達(dá)蛋白或核酸等物質(zhì),然后經(jīng)過(guò)破壁后提取細(xì)胞內(nèi)酶、蛋白質(zhì)等活性的產(chǎn)物是生物工程中的重要技術(shù)。首先富集菌體,收集胞內(nèi)產(chǎn)物的細(xì)胞或菌體。然后進(jìn)行細(xì)胞重懸,用適當(dāng)?shù)木彌_液或培養(yǎng)液將離心或沉降等方法得到的固體(沉淀、細(xì)胞、活性物質(zhì)等等)重新懸浮。其次進(jìn)行細(xì)胞破碎,使產(chǎn)物轉(zhuǎn)移到液相中。最后收集含生化物質(zhì)的液相,進(jìn)行碎片分離,分離除去細(xì)胞、菌體、細(xì)胞碎片、蛋白質(zhì)的沉淀物和絮凝體等固體懸浮物,得到上清液或?yàn)V液。然后從澄清的濾液中提取胞內(nèi)產(chǎn)物,從細(xì)胞裂解物中獲取目標(biāo)產(chǎn)物。
高壓細(xì)胞破碎儀是生物工程中一種重要的實(shí)驗(yàn)、生產(chǎn)設(shè)備,能夠快速、高效地將細(xì)胞破碎并釋放其胞內(nèi)物質(zhì)。高壓細(xì)胞破碎儀具有破碎組織、細(xì)菌、病毒、孢子及其它細(xì)胞結(jié)構(gòu),均質(zhì)、乳化、混合、消泡、分散、提取、加速反應(yīng)等功能,故廣泛應(yīng)用于生物工程、基因工程、細(xì)胞工程、酶工程、蛋白質(zhì)工程、微生物工程、生物化學(xué)、表面化學(xué)、藥物化學(xué)、生物醫(yī)藥、生物制品等等實(shí)驗(yàn)室研究或企業(yè)生產(chǎn)。高壓細(xì)胞破碎儀是胞內(nèi)物質(zhì)(蛋白質(zhì)、酶、核酸、DNA/RNA)的提取和均質(zhì)主要的樣品制備手段,可用于蛋白質(zhì)研究、核酸萃取、破碎不同prokaryotic(原核)、eurkaryotic細(xì)胞等,是生物工程及生物制藥等行業(yè)研發(fā)及生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)設(shè)備。