應(yīng)用背景
又稱昆蟲桿狀病毒系統(tǒng)（Baculovirus expression vector system，BEVS），屬于真核細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)，更接近哺乳動物細(xì)胞的表達(dá)系統(tǒng)，但不同于酵母和哺乳動物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)。昆蟲表達(dá)系統(tǒng)憑借其穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)體系、高表達(dá)水平及翻譯后修飾功能而被普遍認(rèn)可為一種表達(dá)大規(guī)模蛋白的強(qiáng)有力的工具,可以提供高活性的重組蛋白，解決在其它體系中無法解決的蛋白活性困難。昆蟲表達(dá)系統(tǒng)由于其具有高效的表達(dá)能力，通過BEVS得到的重組病毒易于篩選、具有翻譯后修飾功能、表達(dá)外源基因的效率較高。BEVS還可以同時表達(dá)多個外源基因，在分泌蛋白生物活性的同時增加產(chǎn)量。因此，BEVS在科研和工業(yè)生產(chǎn)中通常應(yīng)用于大規(guī)模重組蛋白的制備。應(yīng)用的菌株有sf9、sf21、High-5等。
應(yīng)用案例
通過轉(zhuǎn)座作用將轉(zhuǎn)移載體中的表達(dá)組件定點(diǎn)轉(zhuǎn)座到能在大腸桿菌中繁殖的桿狀病毒穿梭載體上，通過抗性和藍(lán)白斑篩選到重組穿梭質(zhì)粒，提取穿梭質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞后，得到的子代病毒即為重組病毒。將病毒上清浸染昆蟲細(xì)胞，獲得表達(dá)的重組蛋白。昆蟲表達(dá)系統(tǒng)相比其他表達(dá)系統(tǒng)，具有大蛋白正確折疊、具有真核翻譯后修飾、毒性蛋白可被表達(dá)等特點(diǎn)，適用于病毒疫苗、信號分子、細(xì)胞因子、激酶等。用于生產(chǎn)具有哺乳動物細(xì)胞末端唾液酸化修飾的N糖蛋白。
解決方案
通過菌種轉(zhuǎn)基因的方式表達(dá)蛋白或核酸等物質(zhì)，然后經(jīng)過破壁后提取細(xì)胞內(nèi)酶、蛋白質(zhì)等活性的產(chǎn)物是生物工程中的重要技術(shù)。首先富集菌體，收集胞內(nèi)產(chǎn)物的細(xì)胞或菌體。然后進(jìn)行細(xì)胞重懸，用適當(dāng)?shù)木彌_液或培養(yǎng)液將離心或沉降等方法得到的固體（沉淀、細(xì)胞、活性物質(zhì)等等）重新懸浮。其次進(jìn)行細(xì)胞破碎，使產(chǎn)物轉(zhuǎn)移到液相中。最后收集含生化物質(zhì)的液相，進(jìn)行碎片分離，分離除去細(xì)胞、菌體、細(xì)胞碎片、蛋白質(zhì)的沉淀物和絮凝體等固體懸浮物，得到上清液或?yàn)V液。然后從澄清的濾液中提取胞內(nèi)產(chǎn)物，從細(xì)胞裂解物中獲取目標(biāo)產(chǎn)物。
應(yīng)用設(shè)備
高壓細(xì)胞破碎儀是生物工程中一種重要的實(shí)驗(yàn)、生產(chǎn)設(shè)備，能夠快速、高效地將細(xì)胞破碎并釋放其胞內(nèi)物質(zhì)。高壓細(xì)胞破碎儀具有破碎組織、細(xì)菌、病毒、孢子及其它細(xì)胞結(jié)構(gòu)，均質(zhì)、乳化、混合、消泡、分散、提取、加速反應(yīng)等功能，故廣泛應(yīng)用于生物工程、基因工程、細(xì)胞工程、酶工程、蛋白質(zhì)工程、微生物工程、生物化學(xué)、表面化學(xué)、藥物化學(xué)、生物醫(yī)藥、生物制品等等實(shí)驗(yàn)室研究或企業(yè)生產(chǎn)。高壓細(xì)胞破碎儀是胞內(nèi)物質(zhì)（蛋白質(zhì)、酶、核酸、DNA/RNA）的提取和均質(zhì)主要的樣品制備手段，可用于蛋白質(zhì)研究、核酸萃取、破碎不同prokaryotic（原核）、eurkaryotic細(xì)胞等，是生物工程及生物制藥等行業(yè)研發(fā)及生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)設(shè)備。
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