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納通高壓細(xì)胞破碎儀——重組蛋白表達(dá)純化

發(fā)布日期:2023-08-10   瀏覽次數(shù):372次

1.jpg 應(yīng)用背景

       重組DNA技術(shù)是指將一種生物體(供體)的基因與載體在體外進(jìn)行拼接重組,然后轉(zhuǎn)入另一種生物體(受體)內(nèi),使之按照人們的意愿穩(wěn)定遺傳并表達(dá)出新產(chǎn)物或新性狀的DNA體外操作程序,也稱為分子克隆技術(shù)。因此,供體、受體、載體是重組DNA技術(shù)的三大基本元件。重組蛋白包括各類受體、細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子、轉(zhuǎn)錄因子、免疫檢查點(diǎn)、激素、酶、病毒抗原、抗體片段、Prodots等,可用于蛋白結(jié)構(gòu)研究、新藥發(fā)現(xiàn)、生物藥生產(chǎn)、免疫檢測(cè)、試劑開發(fā)、抗體制備、體外酶活測(cè)定等商業(yè)領(lǐng)域以及ELISA、免疫試驗(yàn)、細(xì)胞試驗(yàn)等科學(xué)研究。



1.jpg 應(yīng)用案例

       基因表達(dá)(gene expression)是指將來自基因的遺傳信息合成功能性基因產(chǎn)物的過程,基因表達(dá)產(chǎn)物通常是蛋白質(zhì),但是非蛋白質(zhì)編碼基因如轉(zhuǎn)移RNA(tRNA)或小核RNA(snRNA)基因的表達(dá)產(chǎn)物是功能性RNA?;蚬こ蹋╣enetic engineering)又稱基因拼接技術(shù)和DNA重組技術(shù),基因工程要素包括外源DNA,載體分子,工具酶和受體細(xì)胞等?;蚬こ淌窃诜肿铀缴蠈?duì)基因進(jìn)行操作的復(fù)雜技術(shù)。它是用人為的方法將所需要的某一供體生物的遺傳物質(zhì)——DNA大分子提取出來,在離體條件下用適當(dāng)?shù)墓ぞ呙高M(jìn)行切割后,把它與作為載體的DNA分子連接起來,然后與載體一起導(dǎo)入某一更易生長(zhǎng)、繁殖的受體細(xì)胞中,以讓外源物質(zhì)在其中“安家落戶”,進(jìn)行正常的復(fù)制和表達(dá),從而獲得新物種的一種嶄新技術(shù)。基因工程藥物研發(fā)的主要環(huán)節(jié)有基因的克隆和基因工程菌的構(gòu)造、重組細(xì)胞的培養(yǎng)、目的產(chǎn)物的分離純化等。針對(duì)這些主要環(huán)節(jié),研究人員正致力于高效表達(dá)、培養(yǎng)工藝及下游分離純化等方面的研究。隨著基因工程技術(shù)的不斷發(fā)展,目前已有多種表達(dá)系統(tǒng)可用于生產(chǎn)具有醫(yī)療價(jià)值的人或動(dòng)物來源的蛋白質(zhì)。




1.jpg 解決方案

       重組蛋白是應(yīng)用了重組DNA或重組RNA的技術(shù)從而獲得的蛋白質(zhì)。即應(yīng)用基因重組技術(shù),獲得連接有可以翻譯成目的蛋白的基因片段的重組載體,之后將其轉(zhuǎn)入可以表達(dá)目的蛋白的宿主細(xì)胞從而表達(dá)特定的重組蛋白分子。通常,難以從天然來源直接獲得高質(zhì)量的特定蛋白,尤其是人體蛋白。很多研究者通過將基因克隆至可在易培養(yǎng)細(xì)胞中操作的人工載體上,通過異源表達(dá)來克服這個(gè)問題,這些細(xì)胞包括大腸桿菌、畢赤(酵母)及一系列的昆蟲細(xì)胞和哺乳動(dòng)物細(xì)胞。故重組蛋白是利用DNA(RNA)重組技術(shù)表達(dá)的蛋白重組。重組DNA技術(shù)分上游技術(shù)和下游技術(shù)兩大組成部分。上游技術(shù)為基因重組、克隆和表達(dá)的設(shè)計(jì)與構(gòu)建(即DNA重組技術(shù));下游技術(shù)為基因工程菌或細(xì)胞或基因工程生物體的大規(guī)模培養(yǎng)、基因產(chǎn)物的分離純化過程。



1.jpg 應(yīng)用設(shè)備

       高壓細(xì)胞破碎儀是生物工程中一種重要的實(shí)驗(yàn)、生產(chǎn)設(shè)備,能夠快速、高效地將細(xì)胞破碎并釋放其胞內(nèi)物質(zhì)。高壓細(xì)胞破碎儀具有破碎組織、細(xì)菌、病毒、孢子及其它細(xì)胞結(jié)構(gòu),均質(zhì)、乳化、混合、消泡、分散、提取、加速反應(yīng)等功能,故廣泛應(yīng)用于生物工程、基因工程、細(xì)胞工程、酶工程、蛋白質(zhì)工程、微生物工程、生物化學(xué)、表面化學(xué)、藥物化學(xué)、生物醫(yī)藥、生物制品等等實(shí)驗(yàn)室研究或企業(yè)生產(chǎn)。高壓細(xì)胞破碎儀是胞內(nèi)物質(zhì)(蛋白質(zhì)、酶、核酸、DNA/RNA)的提取和均質(zhì)主要的樣品制備手段,可用于蛋白質(zhì)研究、核酸萃取、破碎不同prokaryotic(原核)、eurkaryotic細(xì)胞等,是生物工程及生物制藥等行業(yè)研發(fā)及生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)設(shè)備。



1.jpg 納通優(yōu)勢(shì)
       蛋白表達(dá)是將目的基因通過電轉(zhuǎn)化或者熱激等手段轉(zhuǎn)入合適的宿主中,利用宿主的特定生理、生化和遺傳特點(diǎn)進(jìn)行目標(biāo)蛋白大量表達(dá)及純化的生物技術(shù)。胞內(nèi)表達(dá)的優(yōu)點(diǎn)是表達(dá)量高,糖基化程度很低或無糖基化,由于是在胞內(nèi)進(jìn)行表達(dá),因此對(duì)培養(yǎng)基及發(fā)酵條件要求不高,不易造成蛋白質(zhì)的降解,并且胞內(nèi)表達(dá)的重組蛋白具有良好的活性和生物安全性,更容易實(shí)現(xiàn)高密度發(fā)酵表達(dá)目的蛋白等,尤其是針對(duì)需要表達(dá)且不會(huì)過糖基化且有生物活性的異源蛋白,采用胞內(nèi)表達(dá)更為合適,但是胞內(nèi)表達(dá)需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行破碎才可以收集產(chǎn)物。高壓均質(zhì)法是工業(yè)上常用的破碎細(xì)胞的方法之一,屬于物理破碎細(xì)胞的方法。
◆破壁能力:高壓設(shè)計(jì),輕松上壓;均質(zhì)效率高,工藝穩(wěn)定;穩(wěn)定的破碎能力,更高的胞內(nèi)物提取;純機(jī)械破碎,無化學(xué)污染;可放大工業(yè)化生產(chǎn)工藝設(shè)備
◆控溫效果:獨(dú)特溫控設(shè)計(jì),內(nèi)置和外置雙向控溫,確保均質(zhì)過程及出料溫度可控
◆活性保障:循環(huán)的控溫系統(tǒng),蛋白活性不失活,細(xì)胞破碎后,活性保值高達(dá)99%
◆無菌保障:金屬結(jié)構(gòu)連接,沒有O型圈或墊片,無死角設(shè)計(jì);在線排空結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì);所有機(jī)型均可實(shí)現(xiàn)在線清洗(CIP)、循環(huán)清洗、拆裝清洗、在位滅菌(SIP)


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