應(yīng)用背景
腫瘤壞死因子( Tumor Necrosis Factor,TNF)是一種的具有抗腫瘤活性的細(xì)胞因子，具有抗腫瘤、抗病毒和免疫調(diào)節(jié)等多種生物活性。1975年，Carswell等發(fā)現(xiàn)并命名了TNF:先用細(xì)菌內(nèi)毒素處理小鼠，而后在小鼠的血清中發(fā)現(xiàn)一種物質(zhì)會(huì)導(dǎo)致腫瘤壞死，并將其稱為腫瘤壞死因子。1984年，Pennica等首先對(duì)人TNF-a的cDNA進(jìn)行了成功克隆，并在大腸桿菌中得到了表達(dá)。1985年，Shalaby把腫瘤壞死因子分為TNF-α和TNF-β。
應(yīng)用案例
基因工程藥物研發(fā)的主要環(huán)節(jié)有基因的克隆和基因工程菌的構(gòu)造、重組細(xì)胞的培養(yǎng)、目的產(chǎn)物的分離純化等。針對(duì)這些主要環(huán)節(jié)，研究人員正致力于高效表達(dá)、培養(yǎng)工藝及下游分離純化等方面的研究。工程大腸桿菌HMS174菌種的全面檢定，確認(rèn)該重組菌rmh-TNF工程菌構(gòu)建正確，目的蛋白占菌體總蛋白的百分含量大于30%，菌種保持穩(wěn)定，菌種穩(wěn)定性好，呈短棒狀，無芽孢、支原體等微生物污染，革蘭染色及生化檢定呈典型的大腸桿菌特征，該菌適用于工程菌菌種庫。
解決方案
重組DNA技術(shù)分上游技術(shù)和下游技術(shù)兩大組成部分。上游技術(shù)為基因重組、克隆和表達(dá)的設(shè)計(jì)與構(gòu)建（即DNA重組技術(shù)）；下游技術(shù)為基因工程菌或細(xì)胞或基因工程生物體的大規(guī)模培養(yǎng)、基因產(chǎn)物的分離純化過程。
1、發(fā)酵罐培養(yǎng)：根據(jù)rmh-TNF的表達(dá)，使用單因素法對(duì)由rmh-TNF在大腸桿菌中表達(dá)時(shí)的誘導(dǎo)時(shí)機(jī)、誘導(dǎo)維持時(shí)間、pH值、溶解氧等進(jìn)行了研究，選擇出較好的發(fā)酵工藝參數(shù)。根據(jù)rmh-TNF代謝特點(diǎn)，通過對(duì)補(bǔ)料工藝的研究，確定了注射用重組改構(gòu)人腫瘤壞死因子發(fā)酵罐發(fā)酵開始誘導(dǎo)后高溫滅菌的補(bǔ)料培養(yǎng)基以流加的方式對(duì)發(fā)酵罐進(jìn)行補(bǔ)加的新補(bǔ)料工藝。
2、發(fā)酵液離心：用高速離心的方法收集菌體，將放罐接口與管式分離機(jī)進(jìn)液口連接，開啟管式分離機(jī)冷凍水的供水閥門，開啟管式分離機(jī)(16000 rpm),控制發(fā)酵液流速1.0-1.5L/min離心，上清液經(jīng)專用管道排至自動(dòng)滅活罐滅活后排棄。離心完畢后取出菌體。
3、菌體洗滌：將菌體混懸于TES溶液中，緩緩攪拌洗滌，用高速冷凍離心機(jī)，在4℃下，8000 rpm,離心20分鐘。重復(fù)洗滌操作一次。濕菌體稱重，-20℃冰箱保存。
4、菌體破碎：將菌體混懸，調(diào)節(jié)高壓勻漿機(jī)泵馬達(dá)進(jìn)氣閥門和出料管進(jìn)氣閥門使流出管壓力在5000-20000 Psi范圍內(nèi)對(duì)菌體進(jìn)行勻漿破碎得到細(xì)胞破碎液。
應(yīng)用設(shè)備
高壓細(xì)胞破碎儀是生物工程中一種重要的實(shí)驗(yàn)、生產(chǎn)設(shè)備，能夠快速、高效地將細(xì)胞破碎并釋放其胞內(nèi)物質(zhì)。高壓細(xì)胞破碎儀具有破碎組織、細(xì)菌、病毒、孢子及其它細(xì)胞結(jié)構(gòu)，均質(zhì)、乳化、混合、消泡、分散、提取、加速反應(yīng)等功能，故廣泛應(yīng)用于生物工程、基因工程、細(xì)胞工程、酶工程、蛋白質(zhì)工程、微生物工程、生物化學(xué)、表面化學(xué)、藥物化學(xué)、生物醫(yī)藥、生物制品等等實(shí)驗(yàn)室研究或企業(yè)生產(chǎn)。高壓細(xì)胞破碎儀是胞內(nèi)物質(zhì)（蛋白質(zhì)、酶、核酸、DNA/RNA）的提取和均質(zhì)主要的樣品制備手段，可用于蛋白質(zhì)研究、核酸萃取、破碎不同prokaryotic（原核）、eurkaryotic細(xì)胞等，是生物工程及生物制藥等行業(yè)研發(fā)及生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)設(shè)備。
納通優(yōu)勢
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